Сыворотки сальмонеллезные. Сыворотка сальмонеллезная поливалентная ABCDE

Получают так же, как и другие диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования сальмонелл в реакции аг­глютинации.

Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы. Представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностику-мы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применя­ют для серодиагностики брюшного тифа в реакции Видаля.

Типовые сальмонеллезные бактериофаги. Применяют для фа-готипирования сальмонелл.

Брюшнотифозная моновакцинд и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Применяют для специфи­ческой активной профилактики брюшного тифа.

Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики брюшного тифа.

Коли-бактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E.coli штамма М17, обладающего выраженными анта­гонистическими свойствами в отношении ряда патогенных ки­шечных бактерий. Применяют для нормализации кишечной микрофлоры при дисбактериозе и лечении дизентерии, глав­ным образом у детей.

Бифидумбактерин. Содержит лиофильно высушенную взвесь живых клеток B.bifidum. Применяют для лечения хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей и ди­зентерии.

Бификол. Содержит смесь высушенных живых бактерий E.co­li штамма М17 и B.bifidum. Показания к применению те же.

Лактобактерин. Содержит продукты жизнедеятельности лак-тобактерий. Выпускается в таблетированном виде. Применяют для лечения дисбактериозов у детей.

Антибиотики: сульфаниламиды, полусинтетические пени-циллины, цефалоспорины 2-4-го поколения, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолоны, полимиксин.

Тема 13.3. ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ

ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ, ИНТОКСИКАЦИЙ, ХОЛЕРЫ

И ДРУГИХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

А Программа

1. Биологические свойства возбудителей холеры, пище­вых токсикоинфекций и интоксикаций. Их патоген-ность, экология, особенности инфекции и эпидемио­логия вызываемых заболеваний.

2. Лабораторная диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

1. Мазки из чистых культур возбудителей пищевых ин­токсикаций кишечных инфекций: Staphylococcus aure­us, Clostridium perfringens, Vibrio cholerae. Окраска по методу Грама.

2. Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Бактериологическая диагностика холеры.

2.1. Указать материал для исследования.

2.2. Идентификация чистой культуры вибрионов, вы­деленных от больного:

1) изучить морфологические и тинкториальные свойства: микроскопировать мазок из чистой культуры, выделенной от больного;

2) изучить антигенные свойства: отметить резуль­таты развернутой реакции агглютинации с диа­гностической 01-сывороткой;

3) изучить биохимические свойства: отметить ре­зультат гексаминового теста;

4) определить чувствительность выделенной куль­туры к диагностическим бактериофагам;

5) отметить способность к росту на среде с поли-миксином;

6) дать заключение.

3. Диагностика ботулизма:

1) указать материал для исследования;

2) проанализировать результаты РИГА для обнаруже­ния ботулотоксина в сыворотке крови больного (реакция Бойдена). Дать заключение.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи­
лактическими препаратами.

Методические указания

■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфек­ций, вызванных Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, рвотные мас­сы, промывные воды желудка больного, остатки пищевых про­дуктов - возможные источники и факторы передачи инфек­ции.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Производят путем посева

Материала на дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар и др.) для выделения чистой культуры сальмонелл и эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для вы­явления бактерий рода Proteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20-24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие "ползучего" роста, ха­рактерного для Proteus spp., в пробирке со скошенным пита­тельным агаром. Подозрительные колонии пересевают на ско­шенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агг­лютинации на стекле, используя смеси диагностических сыво­роток. На следующий день с чистой культурой ставят развер­нутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецеп-торной сывороткой и делают посев на среды "пестрого" ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл или эшерихий из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой ток-сикоинфекции - источнике заболевания. При наличии "пол­зучего" роста на скошенном питательном агаре из конденса­ционной воды петлей берут материал для приготовления пре­парата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохи­мические и другие признаки и устанавливают вид: P.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.

Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этио­логии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргу­ментирована: а) бактериологическим, серологическим, эпиде­миологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов ус­ловно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.

■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ИНТОКСИКАЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Микробиологическая диагностика стафилококковых пище­вых интоксикаций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, про­мывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Диагностика основана на об­наружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеро-токсин Staphylococcus spp. экстрагируют изотоническим раство-

ром хлорида натрия, затем определяют его присутствие и се­рологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С. Техника постановки реакции описана выше (см. рис. 10.1.6). Исполь­зуют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.

Бактериологическое исследование. С целью выделения чис­той культуры стафилококка исследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме (см. тему 12.1) чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых ин­токсикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно исполь­зовать биопробу - скормить изучаемый материал котятам-со­сункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30-60 мин после скармливания.

Похожая информация.

Сыворотки диагностические сальмонеллёзные адсорбированные агглютинирующие сухие для РА ПЕТСАЛ О — типовые: 1, 2, 3.10, 4, 5, 6.1, 6.2, 627, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13.22, 14.24, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 25, 28, 30, 34, 35, 38, 40, 41, 42, 43 ,44, 45, 46, 47, 48, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 65, 66, 67, Vi

Сыворотки диагностические сальмонеллёзные ПЕТСАЛ О-типовые

ПЕТСАЛ® поливалентная О-сыворотка, адсорбированная для реакции агглютинации (РА), полученная из крови кроликов, содержащая O-антитела к антигенам основных групп сальмонелл

Сыворотки диагностические сальмонеллёзные ПЕТСАЛ О-типовые Функциональное назначение

Серологическая идентификация бактерий Salmonella spp. по схеме Кауффмана-Уайта в реакции агглютинации на стекле без дальнейшего разведения.
Поливалентные сыворотки основных групп (A, B, C, D, E) содержат О-антитела против антигенов 1; 2; 3; 4; 5; 61; 62; 7; 8; 9; 10; 12; Vi. Титр специфических антител не ниже 1:40.
Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гомологичные O- и H- антигены, и не агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гетерологичные О- и Н- антигены. Учет результатов реакции проводят по четырехкрестной системе в течение 1-2 минут

Сыворотки диагностические сальмонеллёзные ПЕТСАЛ О-типовые Технические характеристики

Сыворотки по 2 мл, лиофилизированны.
Гомогенный порошок кремового цвета, гигроскопичен.
Фасовка в ампулах вместимостью 5 мл, герметично запаяны. Упаковка и маркировка согласно ТУ 9389-008-01895016-07 по 5 или 10 ампул одного наименования в пачке или коробке картонной. В каждую коробку вложена инструкция по применению, сокращенная схема антигенной структуры бактерий рода Salmonella, ампульный нож.
Препарат хранят в сухом темном помещении при температуре от +4 до 10°C.
Срок годности - 3 года с даты производства, указанной на упаковке.
Зарегистрировано в ФС СЗ.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле. монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (О) Пренадлежность к группе

Диагност. Ат, кот. получают в 3 этапа: на 1-ом выбираем сальмонелу (например S.typhimurium c Аг структурой О-1,4,5,12; Mi 1,2) нагревают на водяной бане для разрушения жгутиков Н-Аг,ост. Только О-Аг 1,4,5,12. На втором этапе проводят гипериммунизацию кроликов оставшимся О-Аг сальмонелл, у кролика образуются О-1,4,5,12 Ат. Это поливалентная сыворотка. На 3-ем этапе проводим истощение сыворотки по Кастеллани. Для этого и получают сыворотку добавляют предварительно нагретых на вод. Бане из той же сер.группы например S.hudelberg o-45,12 Аг, произойдет связь Аг и оставшегося О-1 Ат. Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.

47Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к Shigella flexneri I-V.

48Агглютинирующая адсорбированная сальмонеллёзная О-сыворотка рецептор 9.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.

50. Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллёзная О-сыворотка (групп А, В, С, Д, Е).

Препарат диагностический. Содержит антитела к О-антигену. Представляет сыворотку крови животных, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.

51 Агглютинирующая адсорбированная сальмонеллёзная Н-сыворотка рецептор d

Препарат диагностический. Содержит антитела к Н-антигену рецептору d. Представляет сыворотку крови кроликов, иммунизированных убитой культурой сальмонелл. Получен по методу Кастеллани. Предназначены для серологической идентификации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на стекле.

50.Агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к Shigella flexneri I-V.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляют собой сыворотки кроликов, иммунизированных формалинизированными и живыми взвесями типичных по всем признакам шигелл. При взаимодействии с соответствующими микроорганизмами сыворотки вызывают их агглютинацию. Предназначены для серологической идентефикации Shigella flexneri I-V. Диагностические шигеллёзные сыворотки представляют собой лиофилизированные адсорбированные сыворотки кроликов, содержащие монорецепторные антитела к 38 наименованиям антигенов. К восьми группам антигенов выпускаются поливалентные сыворотки. Препараты предназначены для идентификации бактерий рода Shigella в реакции агглютинации. Диагностические шигеллёзные сыворотки имеют титр антител в реакции агглютинации не менее 1:40. С помощью данных сывороток можно определить любые бактерии рода Shigella согласно международной классификации. Препарат разлит в ампулы по 2мл. Выпускают в сухом виде. Срок годности монорецепторных сухих сывороток - 5 лет, поливалентных сухих – 3 года при хранении в сухом тёмном месте при температуре 4-80 С.

Препарат представляет собой лиофилизированные иммунные адсорбированные сыворотки крови кроликов или баранов. Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гомологичные О- и Н-антигены, и не агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гетерологичные О- и Н-антигены.

Назначение: серологическая идентификация бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на предметном стекле.

1. Препарат после вскрытия ампулы растворить в 1 или 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Растворенные сыворотки могут храниться в пробирках, закрытых резиновыми пробками при температуре 7 градусов в течение 1 мес.

2. На предметное стекло нанести пипеткой каплю растворенной сыворотки, вблизи нее петлю культуры, выращенной в течение 18-24 ч на питательном скошенном агаре при температуре 37 градусов, растереть ее в сыворотке. Для определения О-антигена следует брать культуру с верхней части агара,а для определения Н-антигена-с нижней части агара.

3. Производится учет результатов:

++++ -отчетливый агглютинат при полном просветления жидкости

+++ -отчетливый агглютинат на фоне мутноватой жидкости

++ -незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости

+ -незначительное количество агглютината на фоне мутной жидкости

Гомогенная мутная жидкость

Положительной считается реакция агглютинации интенсивностью не менее, чем +++.

8. Дифференциация(РА с сальмонеллезным бактериофагом).

9. Выдача результатов.

10.05 -работа в серологии- провела РПГА(реакция Хеддельсона при бруцеллезе).

Подготовка посуды к серологическому исследованию.

Обработка планшет:1. Выдерживают в 1% растворе соляной кислоты не менее 1 ч.

2. Промывают в теплой мыльной воде, протирая каждую лунку тампоном с ватой.

3. Прополаскивают 20 раз в проточной воде.

4 .Заливают дист. водой и оставляют до утра.

5. Утром сливают воду с планшет.

6. Подсушивают при комнатной температуре.

7. Перед постановкой реакции каждую лунку протирают тампоном с ватой, смоченной в физиологическом растворе.

Обработка посадок на дозатор

1. Уложить насадки в стеклянную емкость и залить 3-6% раствором перекиси водорода.

2. Поместить емкость с насадками в термостат, нагретый до температуры 50 градусов и выдержать при данной температуре в течении 3 ч.

3. Переложить насадки в емкость с дистиллированной водой, закрыть крышкой и выдержать при комнатной температуре 5 мин.

4. Высушить насадки при температуре 50 градусов 15 мин.

Проверила рН физиологического раствора с помощью индикаторной полоски(в норме рН=7,2-7,4)

Пластинчатый метод (реакция агглютинации на стекле)

1. Надела маску и перчатки, реакцию ставлю на обычном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле.

2. расчерчиваю стекло на квадраты, величиной 4х4 см каждый.

3. Сверху записываю номера испытуемой сыворотки

4 .В последующие квадраты разливаю микропипеткой испытуемую сыворотку в следующих дозах:0,04; 0,02; 0,01 мм, контроль сыворотки и антигена.

5. Сыворотку осторожно смешиваю с антигеном стеклянной палочкой, начиная с минимальной дозы.

6 .Стекло слегка подогреваю над пламенем горелки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла. В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья.

7 .Обработала стол дез.средством

8. Сняла маску и перчатки, вымыла руки.

Цифровой отчет

Подготовка сыворотки крови-6

Реакций Хедельсона и Райта-1

Учет иммунологических реакций-1

Выдача результатов-1

Выписка протоколов-1

Двенадцатый день практики.

Санитарно-бактериологическое исследование воды.

Цель: Отбор проб водопроводной воды и посев по ГОСТу методом мембранных результатов. Отбор проб пищевых продуктов. Отбор проб воздуха в боксе на бактериальную обсемененность. Учет и выдача результатов.

Метод мембранных фильтров.

Первый день исследования

В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3). По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра). Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.

Второй день исследования

Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ. Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).

Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ. При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками - для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс. Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

Расчет. 300 мл - 3 колонии

х = 1; коли-индекс 1

Отбор пробы воды

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) пробками и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Многоразовая посуда, в том числе пробки, должны выдерживать стерилизацию сухим жаром или автокла-вированием.

Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил стерильности. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 минут при полностью открытом кране. Если отбирают воду после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, до стерилизации вносят натрий серноватистокислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком. Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием названием пробы, места забора, даты (год, месяц, число, час), цель исследования, куда направляется проба для исследования, подпись лица, взявшего пробу.